与多克隆抗体不同,单克隆抗体是针对抗原上的单个表位的特异性抗体,而多克隆抗体是针对抗原上不同表位的混合抗体。单克隆抗体的这种特异性使研究人员能够探测到这个表位的变化,即使这种变化很细微——有时小到一个氨基酸的变化。单克隆抗体的主要优点之一是它们是由杂种细胞系或重组细胞系生成的,这种具有相同特异性和结构的抗体供应是无限的。
徕博科使用两种不同的技术来生成单克隆抗体:杂种细胞和B细胞克隆。杂种细胞技术是使用抗原对啮齿动物进行免疫,当检测到足够的免疫反应时,再将产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞系融合并进行筛选。而B细胞克隆则是先从免疫动物中筛选出脾细胞,然后从选定的B细胞中克隆和表达重链和轻链基因。这两种技术都可以生成几乎无限量供应的具有相同特性的抗体。
杂种细胞生成
- 啮齿类宿主物种
- 使用脾细胞和/或淋巴结进行融合
- 多种融合程序,如聚乙二醇(PEG)或电融合
B细胞克隆
- 几乎任何宿主物种
- 使用流式细胞术分离抗原特异性B细胞
- 克隆重链和轻链基因
- 在哺乳动物载体中表达,稳定的细胞生成
抗体纯化和表征
- 扩展:
- 腹水或体外测试方法
- 支原体测试,分型
- 杂种细胞系的细胞保存/储存
- 哺乳动物载体的瞬时转染